太平洋时间2021年10月14日上午7点

大型平行CRISPR编辑的大肠杆菌中天然调节元件的异源蛋白工程与表征

由:Inscripta
刚建成时学分:P.A.C.E. CE佛罗里达CE
演讲者

摘要
日期:2021年10月14日
时间:上午7:00(太平洋时间),上午10:00(东部时间)
外源蛋白在模式生物中的表达有许多应用,包括蛋白质工程、工业酶和治疗学的生产以及结构功能的发现。外源蛋白通常从质粒中表达,以促进克隆和基因操作。然而,质粒表达有许多缺点,如稳定性降低和对基因拷贝数的控制有限。通过CRISPR编辑,染色体基因整合和后续编辑变得更加容易,从而可以全面检查蛋白质的表达和功能。在本次网络研讨会中,我们将演示如何生成大肠杆菌利用缟玛瑙对染色体表达的绿色荧光蛋白(GFP)进行饱和诱变文库TM平台。我们鉴定了几个荧光增强或光谱特征改变的工程变种,包括文献验证和新的变种。我们还生成了所有预测的库大肠杆菌启动子和核糖体结合位点(RBS),并使用工程高表达GFP报告系统量化它们的强度。这些高通量实验深入了解了天然调控序列,并直接在宿主基因组中展示了异种蛋白工程的优势。
学习目标
  • 为异种蛋白质工程建立大规模的平行基因组库大肠杆菌
  • 应用基于荧光的检测方法来发现高通量的新变异,并对基因组调控元件进行调查
  • 鉴别具有改变的光谱特性和改进活性的新型绿色荧光蛋白(GFP)变体
  • 使用稳定的染色体GFP报告系统评估天然启动子和核糖体结合位点(RBS)序列的表达
网络研讨会将在现场活动后提供无限的点播观看。
Pabroots被ASCLS P.A.C.E批准为临床实验室科学中继续教育计划的提供者。®程序。通过参加这个网络研讨会,一旦您全面查看了网络研讨会,您可以获得1个持续的教育信用。

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